ELISA-testen oppdager en rekke sykdommer, og det er grunnen til at den har blitt mye brukt i medisin og mer. Imidlertid er ELISA-testen mest kjent for sin diagnose av borreliose. Hva er ELISA-testen? Hvordan tolke resultatene? Hva er prisen på testen?

Innhold:

  1. ELISA-test - hva oppdager den? Bruk av ELISA
  2. ELISA-test - hva er testen?
  3. ELISA-test og borreliose – når skal du utføre?
  4. ELISA-test - pris. Hvor mye koster en ELISA-test?
  5. ELISA-test - resultater. Kan de være falske positive?
  6. ELISA-test - resultater. Kan de være falske negative?

ELISA-test , det vil si den enzymkoblede immunosorbentanalysen, er en ofte brukt laboratoriemetode som tjener bl.a. for kvantitativ påvisning av antistoffer i blodet

På grunn av denneELISA-testfunnetapplikasjoni diagnostisering av bakterielle sykdommer, somLyme-sykdom med Lyme.

Fordelen med ELISA-metoden er dens enkelhet, raske utførelse og høye følsomhet. ELISA-metoden utføres ved bruk av spesielle plastplater med brønner fylt med for eksempel Borrelia-proteiner (antigener) og spesifikke monoklonale antistoffer, som er designet for å oppdage antistoffer i pasientens prøve.

ELISA-test - hva oppdager den? Bruk av ELISA

Den høye sensitiviteten og enkelheten til ELISA-metoden gjorde den anvendelig i diagnostisering av mange sykdommer, men den er best kjent som diagnosemetoden for borreliose.

I diagnosen Lyme-borreliose, den såk alte indirekte ELISA, som gjør det mulig å oppdage spesifikt IgM eller IgG i det testede materialet. På samme måte kan antistoffer påvises for diagnostiske formål:

  • virusinfeksjoner: herpesvirus (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, cytomegalovirus), HIV, hepatittvirus (HBV og HCV)
  • protozoinfeksjoner: toksoplasmose, giardiasis
  • autoimmune sykdommer: cøliaki (anti-tTG eller anti-DPG antistoffer), Hashimotos sykdom (anti-TG og anti-TPO antistoffer), inflammatoriske tarmsykdommer (anti-ASCA og anti-ANCA antistoffer)
  • parasittsykdommer og allergier,der spesifikke IgE-antistoffer påvises. Deres økte nivå kan indikere tilstedeværelse av allergier, for eksempel mot pollen og mat, eller parasittiske invasjoner (væpnet bendelorm, menneskelig rundorm)

Det er også modifikasjoner av ELISA-metoden (såk alt sandwich ELISA), som tillater påvisning av en testet prøve av andre proteiner enn antistoffer. Da er målet med forskningen å påvise i det biologiske materialet:

  • fragmenter av virus eller bakterier, oftest er disse antigener spesifikke for et gitt patogen
  • serumhormoner, f.eks. østrogen, prolaktin, TSH, fT4, kortisol
  • enzymer, f.eks. calprotectin, pancreas elastase, alkalisk fosfatase
  • tumormarkører, f.eks. CA-125
  • tilstedeværelse av medikamenter i serumet

Denne metoden brukes også i næringsmiddelindustrien, der spormengder av allergener (f.eks. melk, peanøtter), GMO eller giftstoffer i mat kan påvises.

ELISA-test - hva er denne testen?

Diagnosen av for eksempel Lyme-borreliose ved bruk av ELISA-metoden består i å påvise immunproteiner i biologisk materiale - antistoffer som oppstår under responsen mot Borrelia-antigener.

Antistoffer testes i to klasser, IgM og IgG. IgM er de første antistoffene som vises i kroppen ved kontakt med bakterier og som avtar over tid.

Deres plass er tatt av mer vedvarende IgG-antistoffer som kan forbli i kroppen i flere dusin år.

På denne måten blir tilstedeværelsen av bakterier i kroppen indirekte testet ved å påvise antistoffer spesifikt rettet mot Borrelia-spiroketter.

Antistoffer i ulike stadier av infeksjon kan være rettet mot en rekke Borrelia-proteiner. For eksempel, på et tidlig stadium er det p41-proteinet

I de senere stadiene begynner flere og flere proteiner å dukke opp, slik som p21, p30, p39, p43. Dette er grunnen til at diagnosen borreliose er ekstremt vanskelig.

Valget av bakterieproteiner er ekstremt viktig for at testen skal ha høy diagnostisk verdi. Derfor bør rutinemessig ved diagnostisering av borreliose, II-generasjons eller III-generasjons ELISA-tester brukes, der settene med proteiner velges for å oppnå det mest pålitelige resultatet.

ELISA-test og borreliose. Når skal du opptre?

Lyme-borreliose er en bakteriell sykdom forårsaket av bakterien Borrelia burgdorferi og dens mange varianter.

Sykdomsdiagnose er ikke lett på grunn av kompleksiteten til immunresponsen mot Borrelia og ufullkommenhetene i laboratoriemetoder

Den mest brukte laboratoriemetoden er den svært sensitive ELISA-metoden som oppdager spesifikke antistoffer mot bakterielle proteiner

Ved diagnostisering av Lyme-borreliose brukes en indirekte ELISA-metode der følgende stadier skilles:

  • inkubering av brønnene på platen med materiale samlet fra pasienten, for eksempel serum. Hvis det er antistoffer mot Borrelia i det testede materialet, binder de seg til proteiner i bunnen av reaksjonsbrønnen
  • så skylles overflødig serum ut med en spesiell vaskevæske (buffer) og den s.k. konjugat, dvs. et antistoff koblet til et enzym som binder seg til tidligere koblede antistoffer i reaksjonsbrønnene
  • Substrat for konjugatet legges til senere og det er ingen (positiv) eller ingen fargereaksjon (negativ)
  • det siste trinnet er lesingen av leseren (spektrofotometer) av konsentrasjonen av antistoffer mot Borrelia i pasientens serum

ELISA-metoden for borreliose utføres med blod, og ved nevrologiske symptomer (neuroborreliose), også med cerebrospinalvæsken

Ledvæsken bør ikke testes da det er stor sannsynlighet for falske positive resultater

Grunnlaget for diagnosen av sykdommen er kliniske symptomer som indikerer den, bekreftet av resultatene fra laboratorietester

Tillegget av et laboratorietestresultat uten tilstedeværelse av symptomer godkjenner ikke diagnosen borreliose, ettersom det har vist seg at antistoffer mot Borrelia-spiroketter også påvises hos friske mennesker

Serologisk diagnose av Lyme-borreliose begynner med en semikvantitativ ELISA-screeningstest. Hvis resultatet er negativt, betyr det at ingen Borrelia-spiroketter er oppdaget eller resultatet er falsk-negativt.

Hvis resultatet er positivt eller svakt positivt (tvetydig), bekreftende Western blot-testing, som er svært spesifikk.

Dette er for å bekrefte "sannheten" til resultatene oppnådd med ELISA-metoden. Under diagnostikk kan du ikke hoppe over noen av trinnene ovenfor og for eksempel utføre diagnostikk ved hjelp av Western blot-metoden eller stille en diagnose basert på et positivt resultat kun ved bruk av ELISA-metoden

I Polen slutter diagnosen av Lyme-sykdom veldig ofte ved det første screeningsstadiet, noe som forårsaker en feiltolkning av positive eller svakt positive resultater.

Verdt å vite

ELISA-test - pris. Hvor mye koster en ELISA-test?

Testen koster rundt 60zloty og lages umiddelbart. Du kan imidlertid vente i omtrent tre måneder på resultatet av henvisningen

ELISA-test - resultater. Kan de være falske positive?

Falske positive resultater skyldes kryssreaktivitet av IgM-antistoffer med andre proteiner. Antistoffer produsert av kroppen kan "feil" gjenkjenne et antigen fra andre mikroorganismer som Borrelia-antigenet

De vanligste "feilene" oppstår hos personer som er infisert med treponema pallidum, herpesvirus og hos personer med systemisk lupus erythematosus og andre revmatiske sykdommer

ELISA-test - resultater. Kan de være falske negative?

Falsk negative resultater kan vises i et tidlig stadium av infeksjon, deretter bør testen gjentas etter ca. 3-4 uker. Dette kalles serologisk vindu, dvs. den første infeksjonsperioden der kroppen ennå ikke har "klaret" å produsere spesifikke antistoffer.

Tilsvarende hos personer med nedsatt immunforsvar som ikke lager nok antistoffer

Et stort problem, spesielt ved svært intense infeksjoner, er utseendet til den såk alte immunkomplekser som består av Borrelia spirochetes antigener og spesifikke antistoffer for dem

Dette gjør antistoffene "usynlige" for vanlige metoder som ELISA, og selv om de er tilstede i det testede materialet, kan de ikke oppdages.

I slike tilfeller kan laboratoriet bruke å bryte ned immunkomplekser. Denne behandlingen er designet for å frigjøre antistoffene. Denne metoden er imidlertid ikke mye brukt på grunn av mangel på standardisering i laboratorier

Verdt å vite

Hvorfor er det ikke lett å diagnostisere borreliose?

Dette skyldes kompleksiteten til immunresponsen mot Borrelia og begrensningene til laboratoriemetoder. Mangfoldet av varianter og fremveksten av nye infeksjoner som forårsaker infeksjoner, spesielt på det europeiske kontinentet, letter ikke utviklingen av effektive diagnostiske metoder

Flere varianter har nylig dukket opp i Europa, som Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana og Borrelia spielmanii. I tillegg kan Borrelia-spiroketter i kroppen bli til cyster eller oppholde seg på steder i kroppen som er utilgjengelige for cellene i immunsystemet

Å være dermed "usynlig" for immunsystemet. I tillegg er det vist at vevene kan inneholde fragmenter av bakterier som har sterkt pro-inflammatoriske egenskaper. De antas å være ansvarlige for de kroniske symptomene på borreliose, til tross for negative resultater i studienlaboratorium.

Referanser

1. Witecka-Knysz E. et al. Lyme sykdom: hvorfor er diagnose så vanskelig? Laboratoriediagnotiker april 2007.2. Moore A. et al. Gjeldende retningslinjer, vanlige kliniske fallgruver og fremtidige retningslinjer for laboratoriediagnose av borreliose, USA. Emerg Infect Dis. juli 2016, 22 (7) .3. Laboratoriediagnostikk av flåttbårne sykdommer Anbefalinger fra Arbeidsgruppen: Nasjon alt kammer for laboratoriediagnostikere, Nasjon alt folkehelseinstitutt-Nasjon alt hygieneinstitutt, nasjonal konsulent innen infeksjonssykdom, Institutt for infeksjonssykdommer og nevroinfeksjoner, Medical University of Białystok, Polish Society of Virology, Warszawa 2014. Hosseini S. i co: Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) From A to Z. Springer 2022.

Om forfatterenKarolina Karabin, MD, PhD, molekylærbiolog, laboratoriediagnotiker, Cambridge Diagnostics PolskaBiolog av yrke, spesialisert i mikrobiologi, og laboratoriediagnotiker med over 10 års erfaring i laboratoriearbeid. Utdannet ved College of Molecular Medicine og medlem av Polish Society of Human Genetics Leder for forskningsstipend ved Laboratory of Molecular Diagnostics ved Institutt for hematologi, onkologi og indre sykdommer ved det medisinske universitetet i Warszawa. Hun forsvarte tittelen doktor i medisinske vitenskaper innen medisinsk biologi ved det første medisinske fakultetet ved det medisinske universitetet i Warszawa. Forfatter av mange vitenskapelige og populærvitenskapelige arbeider innen laboratoriediagnostikk, molekylærbiologi og ernæring. Til daglig, som spesialist innen laboratoriediagnostikk, driver han innholdsavdelingen ved Cambridge Diagnostics Polska og samarbeider med et team av ernæringsfysiologer ved CD Dietary Clinic. Han deler sin praktiske kunnskap om diagnostikk og kostholdsbehandling av sykdommer med spesialister på konferanser, treningssamlinger og i magasiner og nettsteder. Hun er spesielt interessert i påvirkningen av moderne livsstil på molekylære prosesser i kroppen.

Kategori:

Forskning